RMC可視化超薄切片機(jī)切片前的樣本制備
樣本質(zhì)量直接決定切片成敗。PowerTome PCZ對樣本的基本要求是:包埋塊硬度均勻、切面平整、無雜質(zhì)。正確操作是發(fā)揮設(shè)備性能的關(guān)鍵。以下為PowerTome PCZ標(biāo)準(zhǔn)操作流程及注意事項(xiàng):
開啟設(shè)備總電源,等待3分鐘預(yù)熱(電子元件穩(wěn)定);
松開樣品夾旋鈕,將包埋塊或冷凍樣品放入卡槽,確保底面與樣品臺貼合;
調(diào)節(jié)三維微調(diào)旋鈕,使樣品切割面與刀刃平行(可通過觀察窗初步確認(rèn));
觸控屏進(jìn)入“參數(shù)設(shè)置"界面,輸入目標(biāo)厚度(如50nm);
根據(jù)樣品硬度調(diào)節(jié)切片速度(樹脂建議2mm/s,冰凍組織建議1mm/s);
調(diào)節(jié)刀臺傾斜角度(首操作建議從5°開始嘗試)。
點(diǎn)擊“開始"按鈕,觀察切片過程,若出現(xiàn)卷邊或斷裂,立即暫停調(diào)整;
切片完成后,關(guān)閉電機(jī),用毛刷清理刀臺碎屑;
避免在設(shè)備運(yùn)行時觸碰刀臺,防止割傷;
每月用無水乙醇清潔導(dǎo)軌,每季度檢查皮帶松緊度。
規(guī)范操作可將設(shè)備故障率降低60%,延長核心部件壽命。生物樣本:以小鼠肝臟為例,流程包括:①固定(4%戊二醛4℃過夜,1%鋨酸后固定2h)→②脫水(梯度乙醇:50%→70%→90%→100%,每步1h)→③滲透(1:1乙醇/環(huán)氧樹脂→純樹脂,過夜)→④包埋(60℃聚合48h)。包埋后需用專用修塊機(jī)將樣本修成梯形(底面約1mm×1mm,高度2-3mm),確保切面暴露在中心。若修塊不平整,切片時易出現(xiàn)“tiao刀"(切片無法連續(xù))。材料樣本:以聚合物薄膜為例,需用冷鑲嵌樹脂(如LR White)包埋,避免熱鑲嵌導(dǎo)致樣本變形。包埋后樣本需在室溫下全固化(24h),再安裝到PCZ樣本頭。對于硬脆材料(如陶瓷碎片),需先用環(huán)氧樹脂浸潤,填補(bǔ)內(nèi)部孔隙,防止切片時碎裂。關(guān)鍵提示: 樣本修塊后需用鋒利單刃刀片預(yù)切,去除表層硬化層,確保切面新鮮——這一步常被新手忽略,卻是減少切片褶皺的重要措施。RMC可視化超薄切片機(jī)切片前的樣本制備